在雄性動物中,精子的發(fā)生起源于精原干細(xì)胞。精原干細(xì)胞(spermatogonial stem cells,SSCs)存在于精巢或睪丸中,是一類既能自我復(fù)制又能分化為精子的干細(xì)胞。精原干細(xì)胞常常應(yīng)用于生殖細(xì)胞移植、體外誘導(dǎo)精子發(fā)生以及細(xì)胞水平上對基因修飾生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物等方面。哺乳動物精原細(xì)胞體外分離、克隆及誘導(dǎo)等的研究取得了較大的進(jìn)展,而魚類精原細(xì)胞的研究僅限于斑馬魚、青鳉和羅非魚、虹鱒等魚類,鱘魚精原細(xì)胞體外培養(yǎng)的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。
達(dá)氏鱘(Acipenser dabryanus)是我國特有的一種淡水定居性魚類,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和科研價(jià)值,被列為國家一級重點(diǎn)保護(hù)動物。自1990年初以來,未檢測到達(dá)氏鱘自然繁殖活動,建立達(dá)氏鱘種質(zhì)細(xì)胞庫,實(shí)現(xiàn)達(dá)氏鱘生殖細(xì)胞移植,是人工保存達(dá)氏鱘物種重要的途徑通過對達(dá)氏鱘精巢細(xì)胞消化分離和冷凍保存的研究,保護(hù)達(dá)氏鱘的遺傳多樣性,同時(shí)還為同種生殖細(xì)胞移植技術(shù)產(chǎn)生具有遺傳多樣性的可育后代,用于保種和人工增殖放流奠定基礎(chǔ);通過對達(dá)氏鱘精原細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立和優(yōu)化,實(shí)現(xiàn)精原細(xì)胞長期體外存活,為研究達(dá)氏鱘精巢微環(huán)境提供理論依據(jù),同時(shí)也為其他鱘魚的生殖細(xì)胞體外培養(yǎng)給予借鑒。
本研究以達(dá)氏鱘為研究對象,取精巢為試驗(yàn)材料做如下研究:對雄性達(dá)氏鱘性腺發(fā)育的連續(xù)檢測,研究達(dá)氏鱘精巢的發(fā)育規(guī)律,揭示達(dá)氏鱘發(fā)育分期及發(fā)育速度與年齡增長的關(guān)系,確定精原細(xì)胞體外培養(yǎng)和冷凍保存的最適時(shí)期。第二,探討兩種酶消化分離達(dá)氏鱘精巢細(xì)胞的效果以及比較不同凍存方法對達(dá)氏鱘精巢細(xì)胞凍存效果的影響。第三,探究精原細(xì)胞體外培養(yǎng)的條件。