摘要：通過研究兩種酶對精巢細胞的消化效果,探究抗凍劑、降溫程序、糖類和卵磷脂對達氏鱘(Acipenser dabryanus)精巢細胞凍存效果的影響,獲得消化凍存后高存活率的細胞。實驗使用0.25%胰蛋白酶和2 mg/m L膠原酶H+500 U/m L中性酶II的組合酶對達氏鱘精巢細胞進行消化,獲得不同消化時間內(nèi)的活細胞數(shù)量。另外,還研究了冷凍稀釋液中分別添加10%二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甲醇(MET)作為抗凍劑,采用-1℃/min慢速降溫以及直接投入液氮中的快速降溫方法凍存,冷凍稀釋液采用D-海藻糖或同濃度D-蔗糖,以及添加5%,8%,11%卵磷脂對凍存效果的影響。結(jié)果顯示:兩種消化酶在同一時間消化所得的活細胞數(shù)和活細胞率無顯著差異,并且都在3 h獲得最多活細胞。慢速降溫的凍存效果極顯著地好于快速降溫(P=0.01)。不同抗凍劑的保存效果差異顯著,復蘇后細胞相對存活率EG(51.70%±5.24%)>MET(45.09%±3.15%)>DMSO(40.18%±3.90%)。不同糖對達氏鱘精巢細胞凍存效果無顯著影響(P>0.05);不同濃度的卵磷脂凍存效果有極顯著差異(P=0.01)。含8%卵磷脂的凍存液對細胞的凍存效果最好,細胞存活率可達93.55%±2.56%,培養(yǎng)10 d后細胞數(shù)目為0 d時的3.19倍。

頡璇, 厲萍,  席萌丹, 郭威, 喬新美, 杜浩, 劉志剛, 危起偉*. 達氏鱘精巢細胞消化分離和超低溫冷凍保存. 淡水漁業(yè), 2016, 46 (5): 19-24.

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